Важные сведения о продукции BIOplastics в ПЦР и Real Time ПЦР- приложениях

Усиление сигнала при использовании белых и матированных микропробирок

Соотношение сигнал/шум при проведении количественной ПЦР может быть существенно повышено за счет использования матированных пробирок, стрипов и планшетов. Установлено, что использование матированных продуктов позволяет генерировать более высокое соотношение сигнал/шум (до 40%) по сравнению с прозрачным исполнением. Белые варианты продукции наилучшим образом повышают данное соотношение сигнал/шум, превосходя на 90% прозрачные, и на 50% матированные. Возможное загрязнение термоблока флуоресцентными красителями, а также различия в покрытии микропробирок могут искажать уровень детектируемого сигнала.

Использование белого варианта пробирок практически полностью исключает данное воздействие, тогда как матированный вариант позволяет его минимизировать по сравнению с прозрачным вариантом. Использование технологии BIOplastics BPLPM (напыление из микрочастиц на внешней поверхности) при изготовлении продукции для ПЦР и ПЦР в реальном времени позволяет добиваться усиления уровня сигнала и минимизировать шумы.

Вариант исполнения микропробирок Уровень сигнала Вероятность интерференции сигнала
Прозрачные 100 100
Слегка матированные 125 70
Слегка матированные + BPLPM 140 50
Матированные 140 50
Матированные+ BPLPM 150 30
Белые 180 <2
Белые+ BPLPM 185 <1

Различия в продукции низкого (0,1 мл), стандартного и высокого профиля

С тех пор, как низкопрофильные микропробирки были выведены на рынок, некоторые компании переименовали оригинальное обозначение «0,2 мл микропробирки с низким профилем» в «0,1 мл микропробирки». Низкопрофильные (0,1 мл) продукты для ПЦР используются в «быстрых системах», таких как ABI, Roche LightCycler® 480, а также в ПЦР-термоциклерах с режимом реального времени с регулируемыми по высоте крышками.

strips

Стрипы стандартного профиля слева и низкого профиля справа

Разница между низкопрофильными микропробирками на 0,1 мл и обычными микропробирками стандартного профиля — это высота продукта и, следовательно, объем, который они могут вмещать. Низкопрофильные пробирки вмещают меньший объем воздуха над реакционной смесью по сравнению с микропробирками стандартного или высокого профиля, что позволяет снизить переход реакционной смеси в газовую фазу, уменьшить концентрирование образцов и нивелировать различия условий реакции, повысить воспроизводимость результатов исследований.

from low to high tubes

Стрипы стандартного профиля слева и низкого профиля справа

В наиболее скоростных термоциклерах используются в основном низкопрофильные микропробирки, стрипы и планшеты, в то время как большинство классических термоциклеров совместимы с пробирками, стрипами и планшетами стандартного и высокого профиля. Обычно, термоциклеры без регулируемых по высоте крышек совместимы только с одним типом изделия определенной высоты профиля.

Изделия BIOplastics доступны во всех вариантах высоты профиля, а метрические параметры продукции низкого, стандартного и высокого профилей представлены на чертежах и фотографиях ниже.

Как технологии BIOplastics обеспечивают превосходное качество продукции

Экстремально равномерная толщина стенок – золотой стандарт для кПЦР

Экстремально равномерная толщина стенок микропробирок не допускает неравномерного испарения реакционной смеси. При этом, происходит равномерный нагрев и охлаждение всего объема реакционной смеси и достигается наиболее высокая воспроизводимость результатов реакции.

Газонепроницаемость

Полипропилен не является полностью газонепроницаемым, и процесс испарения образца через стенки микропробирок является неизбежным. Разработчики BIOplastics проектируют свои микропробирки с тонкими стенками в нижней, посадочной части, для максимальной передачи тепла от нагревательного блока термоциклера, и утолщенные стенки в верхней части, для минимизации испарения через полипропилен. Все это существенно увеличивает воспроизводимость результатов. Толщина стенки изделий BIOplastics определяется и измеряется на расстоянии 3 мм от дна, где имеет следующие значения:

  • для одиночных микропробирок и стрипов: 0,30±0,05 мм
  • для планшетов: 0,35±0,05 мм

Наклон стенки микропробирки для максимального соприкосновения

eu tubes walls

Лучшая посадка за счет
равномерной толщины стенок

Различные бренды и модели термоциклов имеют несколько разные углы и диаметры посадочных отверстий в термоблоке. Компания BIOplastics использует опыт и компетенцию своей сестринской компании (CYCLERtest) и глубокое понимание процессов, происходящих в ходе ПЦР при проектировании своей продукции.

ПЦР-микропробирки BIOplastics имеют угол наклона стенки, оптимизированный для максимального соответствия всем основным брендам и моделям классических термоциклов и термоциклеров с анализом в режиме реального времени (Real-Time), что обеспечивает максимальный теплообмен и оптимальные результаты эксперимента.

Микропробирки низкого, стандартного и высокого профиля

profile tubes

Стандартный слева и низкий профили

В низкопрофильных микропробирках имеется меньший объем воздуха над реакционной смесью, чем в стандартных и высокопрофильных. Это обеспечивает меньшее испарение и переход реакционной смеси в газовую фазу, и соответственно, меньшее концентрирование образцов, выравнивание условий реакции и более воспроизводимые результаты.

Самые скоростные на сегодняшний день термоциклеры совместимы только с низкопрофильными стрипованными микропробирками и планшетами. В то время, как большинство классических термоциклеров совместимы со стандартными и высокопрофильными микропробирками, стрипами и планшетами.

Простое открытие/закрытие микропробирки, «умный» дизайн крышки

«Умная» конструкция и наличие уплотнительных колец вокруг точек запирания микропробирки обеспечивают герметичное закрывание, уменьшают испарение и позволяют достигать более воспроизводимых результатов. Превосходные свойства уплотнительного соединения позволяют проводить реакции ПЦР в объеме до 5 мкл. Конструкция крышки обеспечивает минимальное усилие, необходимое для закрытия и открытия, что высоко ценится пользователями и минимизирует риски контаминации.

Заглубленная оптическая область на крышках

caps

Оптическая область предотвращает загрязнение
поверхности от касания пользователем

Крышки микропробирок и стрипов предназначены для пропускания флуоресцентного сигнала в оптический блок для детектирования в режиме реального времени. Для закрытия стрипов и планшетов компания BIOplastics предлагает широкий ассортимент стрипованных крышек, а также пленки для заклеивания планшетов «Optiseal». Оптически прозрачные крышки имеют максимальную площадь оптической области (12,6 мм2), а толщина «оптического окна» уменьшена до 0,30 мм, что минимизирует поглощение света полипропиленом.

Дизайнеры BIOplastics спроектировали «оптическую область» с заглублением от поверхности крышки, что предотвращает «касание» оптической области в процессе постановки эксперимента. Крышки с широкой оптической областью совместимы с любыми микропробирками, стрипами и планшетами для ПЦР. Прочная конструкция предотвращает возможные деформации при установке и извлечении крышек.

Особый состав полипропилена с низкими характеристиками адгезивности – “ЮЛА” / ULA – Ultra Low Adhesion

Хотя в целом полипропилены химически инертны, они все же имеют заряженные группы, а также обладают статическими свойствами и гидрофобными областями. Различные типы и смеси полипропилена по разному связывают ионы, такие как магний, а также белки, ДНК и другие заряженные группы, что может существенно влиять на результаты эксперимента. Компания BIOplastics при изготовлении своей продукции использует 3 различных состава полипропилена, которые относятся к типам O, A и M. Полипропилен O-типа является оптимальным материалом, при изготовлении продукции для количественной ПЦР. Полипропилен A-типа похож на классическую полипропиленовую смесь, имеет лучшие химические свойства по сравнению с O-типом и пригоден для большинства классических и количественных ПЦР. Материал М-типа является более прочным и, в основном, используется для пробирок 0,5 мл, 1,5 мл и 2 мл, а также наконечников к дозаторам без фильтра. Для постановки ПЦР и Real Time ПЦР мы рекомендуем продукцию из материала O-типа для достижения оптимальных результатов, поскольку он является низкоадгезивным (ULA — Ultra Low Adhesion, Maximum recovery, Low Binding) и показывает самую высокую теплопроводность. Компоненты полипропилена O- и M-типа специально подобраны за счет их низкоадгезивных характеристик по отношению к ДНК, РНК и белкам. Все пробирки, пробирки в стрипах, планшеты для ПЦР, а также все наконечники с фильтром BIOplastics по умолчанию изготовлены из низкоадгезивного полипропилена О-типа (ULA — Ultra Low Adhesion, Maximum recovery, Low Binding). В каталоге BIOplastics Вы также можете найти и другую продукцию с низкой связываемостью ULA – криопробирки, микроцентрифужные пробирки, пробирки для ИФА анализаторов (титер-трубки) и наконечники без фильтра.

Кодирование и маркировка продукции с использованием технологии BPLPM

Одним из последних нововведений компании BIOplastics является включение особых микрочастиц в состав материала, из которого изготовлен ассортимент продукции для ПЦР. В дополнение к основному ассортименту продуктов для ПЦР предлагаются технология BPLPM (смесь микро частиц BIOplastics). Не мешая процессу ПЦР, эти частицы по своей природе увеличивают отношение сигнал / шум при проведении ПЦР в реальном времени. Технология BPLPM позволяет наносить собственную лазерную маркировку. В то время, как другие используют чернила, штампы или красители, содержащие органические растворители, либо наклейки, технология BPLPM от BIOplastics, однозначно маркированному и закодированному продукту. Никаких подписей маркерами, процесс маркировки без ошибок, без удаления меток, без двойных идентификационных номеров и тд. Просто используйте уникальный идентификатор в начале Вашего эксперимента. Свяжите уникальный идентификатор с вашей лабораторией и конкретным образцом. Технология BPLPM используется в выбранном диапазоне продуктов, объем которых будет увеличен в будущем (пробирки, стрипы, планшеты для ПЦР, титер-трубки, микроцентрифужные пробирки, криопробирки). Технология BPLPM особенно полезна для аккредитованных лабораторий, в диагностической практике, что позволяет улучшить процедуры и снизить риски сбоев в маркировке. В зависимости от объемов закупки доступны настраиваемые шаблоны и индивидуальные коды. Это может оказаться полезным для производителей комплектов диагностических наборов и позволит эффективно отслеживать продукты и приложения.

Воспроизводимость кривых при анализе результатов ПЦР в реальном времени

Компания BIOplastics нацелена на обеспечение максимальной точности в изготовлении своей продукции, в то же время точные спецификации продукта способствуют высокой воспроизводимости.

Микропробирки BIOplastics имеют среднюю толщину стенки 0,30 мм и максимальный допуск 0,05 мм. Такие чрезвычайно жесткие допуски обеспечивают однородность и воспроизводимость продукции для ПЦР. Соответственно, достигается воспроизводимость в кривых плавления и кривых плавления высокого разрешения, обычно используемых в пост- ПЦР процессах. Кривые плавления могут быть нормализованы с использованием CYCLERtest® «услуги многоканальной динамической калибровки амплификатора» и других инструментов калибровки. (pcrcontrol.ru, www.cyclertest.com)